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华灿生物科技公司实习报告  

2009-06-22 23:06:28|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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三明学院化学与生物工程系06生物技术  张钦增  20060762118

  专业实习是大学的一个必不可少的过程,是大学生踏入社会的第一步,是检验知识与实践相结合的一个平台。根据教学计划安排,我班到福建华灿生物科技有限公司进行近半个月的专业实习。通过实习,我们学到了很多在课堂上学不到的知识,拓宽了知识面,提高实践动手能力,受益非浅。以下本人在这次实习的实习报告。
  一、实习目的

  实习的目的,在于通过理论与实际的结合、学校与社会的沟通,进一步巩固加深课堂所学过的理论和专业知识,提高实践能力、动手能力、解决问题和分析能力,为后续毕业设计以及毕业论文打下坚实的基础,也为就业提供一定的机会和经验。

  二、实习单位简介

  福建华灿生物科技有限公司地处福建省三明市大田城关和厦门市海沧区,是福建省政府确认的高新技术企业(闽科高[2006]23),主要从事各种生物蛋白酶的研发和生产,包括工具酶(试剂用酶)、医药用酶、食品用酶、饲料用酶和工业用酶等。其中工具酶(试剂用酶)的成功生产部分地填补了国内空白,结束了我国工具酶长期依赖国外进口的历史。该项目技术成果已由福建省科技厅组织鉴定通过(闽科鉴字[2005]68号),获福建省科技进步二等奖(闽政文[2006]582号),具有独立自主的知识产权,并通过国家科技部立项(国科发计字[2006]452号)。2006年被列入国家863计划生物和医药技术领域生物医学关键试剂重点项目指南。2007年被列入福建省政府在建重点项目。

目前华灿公司已投资8000多万元建立了工具酶(试剂用酶)生产线、医药用酶(医药原料中间体)生产线、动物血液综合利用生产线、胎牛及新生牛血清生产线。公司分别在四川省大英和河北省石家庄合资建立了动物脏器、胎牛及新生牛血清原料和半成品生产企业,进一步完善公司的生产原料供应链,发挥产业集群优势。

公司现有生产技术人员320多人,占地面积118多亩,生产厂房、GMP标准车间及相关实验室总面积约20000多平方米,已生产出170多种相关产品。同时,公司同有关单位合作在北京和上海分别设有两处研发中心,从事有关蛋白酶产品的研发和开发。华灿公司分别在广州、上海、长春、成都、长沙等地设有分公司和办事机构,协调市场的产品销售,构成较为完善的营销网络。

  三、实习内容

纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行。在本次的实习中,我认真听讲、积极参与,在实践中去感受,体会,理解和运用所学知识。两周的日出日落,我经过自己的努力,参加以下的实习活动。

1.血液制品生产

我们知道,血液由血浆和血细胞组成。而这个公司主要是提取血液中的血浆和红血球,主要过程如下:猪血经高速管式离心机分离出血浆(上)和红血球(下)。血浆经电热蒸汽机蒸汽煮熟,后去水,三足式离心机脱水,脱完后拿去干燥,粉碎成粉末,包装成品。红血球倒入反应器反应,后加柠檬酸钠、硫酸铜等反应2h,后用三足式离心机弃沉淀物,液体经塞子弃泡沫,超滤至少量。后洗出超滤管中的物质和剩余液体,经沉淀离心分离得到SOD初提物。

2.层析分离技术

首先将乙酸铵和氯化钠加到A柱(作为缓冲液),完后倒入SOD液,层析结束后,加入乙酸铵和氯化钠,待溶液呈蓝绿色时用烧杯接住,后转移到B柱。B柱操作跟A柱一样。

另悉,经B柱层析的SOD后放置-80℃保存,待到一定量时一起用冷冻干燥机干燥,包装成成品。

再生过程:经过一周的层析分离,AB柱黏附着许多杂质、杂蛋白等,必须经过一次大处理,且处理的方法也有所不同。处理方法:A  加入一定量的盐酸(洗脱Cu2+),后加氨水清洗;B  先加入一定量的NaOH溶液,后先后加蒸馏水、盐酸、氨水清洗。

经邵老师和吴老师的详细讲解,我们得知A柱(阳柱)除Cu2+、碱性蛋白等;而B柱(阴柱)主要除酸性蛋白。同时,经过近三天的学习,我们对层析柱的构造都有了较全面的了解,弥补了书本上层析分离的原理认识的不足,加强了动手实践能力,拓展了实践与理论的联系。

3.蛋白测定方法

1)总氮量的测定——微量凯氏定氮法

当被测的天然有机物与浓硫酸共热时,被氧化为二氧化碳和水,而氮转变成氨,氨与硫酸结合生成硫酸铵。在凯氏定氮仪中,加入强碱碱化消化液,使硫酸铵分解,放出氨。借水蒸汽蒸馏法,将氨气蒸入过量标准无机酸溶液中,然后用标准碱溶液进行滴定。根据所测得的氮量,计算样品的含氮量。

    2Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量

测定蛋白质含量测定方法较多,主要有考马斯亮蓝法(Bradford法)、双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。Folin-酚试剂法操作简便,灵敏度高,样品中蛋白质含量高于5μg即可测得,是测定蛋白质含量应用得最广泛的方法之一。所以我们主要学习Folin-酚试剂法测定蛋白质含量。

蛋白质中含有酪氨酸和色氨酸残基,能与Folin-酚试剂起氧化还原反应。反应过程分为两步,第一步:在碱性溶液中,蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成蛋白质-Cu2+复合物;第二步:蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸,生成蓝色的化合物。该呈色反应在30分钟内即接近极限,并且在一定浓度范围内,蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系,故可用比色的方法确定蛋白质的含量。进行测定时要根据蛋白质浓度的不同选用不同的测定波长:若蛋白质含量高时(25-100μg)在500nm波长处进行测定,含量低时(5-25μg)755nm波长处进行测定。最后根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
  
通过邓老师的讲解与指导,使我加深了对分光光度计操作过程,进一步明确蛋白质含量的求法,以及蛋白质含量测定方法的优缺点。

4.基因工程上、下游技术

1LB培养基的配置:

称取蛋白胨10g,酵母浸膏5gNaCl固体10g溶解于1000ml蒸馏水中,用2N氢氧化钠调PH7.4(用PH计标定),然后放置高压(0.11Pa121℃)灭菌锅灭菌20min,后放入冰箱保存。

2)基因工程菌的接种:

往早上灭菌好的培养基加入50ug/ml铵苄(一种抗生素),后用灭菌过的牙签挑起一颗基因工程菌放入培养基中,封好,放在台式恒温摇床机中过夜培养(37℃、110/分钟)。

菌的接种是一个非常重要,且关键的步骤,这一步的成功与否,直接关系到最终的结果。

3)菌种的分离

将培养的细菌摇匀移到锥形瓶中,然后加入30mlPBST缓冲液,用移液枪抽打,使细胞呈悬浮状态。后转入离心管,5000r/min .4-8℃离心10min,取上清液。

往所得的上清液加入适当的溶菌酶(增加破碎效果),后用超声波破碎机破碎。一次3s,间隔5s,共循环30次。期间,破碎10次后应停一下,使仪器降温。

破碎时应将钻头插入液面1-2cm,因悬空会损坏钻头,太深破碎效果不佳。同时,破碎过程应在低温下进行。结束后应清洗钻头。

将破碎完的工程菌高速离心(型号25.512000r/min4-8℃)10min,取上清液。

4)菌种表达产物检测

利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定。其主要原理是:SDS能够与蛋白质结合,破坏蛋白质分子内部、分子之间以及与其他物质分子之间的非共价键,使蛋白质变性而改变原有的空间构象。结合蛋白质分子的SDS是阴离子,当SDS单位浓度大于1mM时,所带负电荷远远超过了它原有的电荷量,从而消除了不同种类蛋白质间的电荷符号的差异,而且分子量越大的蛋白质结合的SDS越多、带负电荷也越多,这就使各蛋白质-SDS复合物的电荷密度(或荷质比)趋于一致;同时,不同蛋白质的SDS复合物形状也相似,都呈椭圆状。因此,在自由电泳时,它们的泳动率基本相同,而在某一适宜浓度的聚丙烯酰胺凝胶介质中电泳时,由于凝胶的分子筛效应,电泳迁移率就取决于蛋白质-SDS复合物的大小,也可以说是取决于蛋白质分子量的大小。

5.超滤技术

超滤原理也是一种膜分离过程原理,超滤利用一种压力活性膜,在外界推动力(压力)作用下截留水中胶体、颗粒和分子量相对较高的物质,而水和小的溶质颗粒透过膜的分离过程。通过膜表面的微孔筛选可截留分子量为3x10000—1x10000的物质。当被处理水借助于外界压力的作用以一定的流速通过膜表面时,水分子和分子量小于300—500的溶质透过膜,而大于膜孔的微粒、大分子等由于筛分作用被截留,从而使水得到净化。也就是说,当水通过超滤膜后,可将水中含有的大部分胶体硅除去,同时可去除大量的有机物等。

实习是每一个大学毕业生必须拥有的一段经历,他使我们在实践中了解社会,让我们学到了很多在课堂上根本就学不到的知识,也打开了视野,长了见识,为我们以后进一步研究学习和走向社会打下坚实的基础。
  最后衷心感谢福建华灿生物科技有限公司给我提供这样一个良好的实习机会!

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